第119期 連續流層析在血液制品純化的應用

2019年05月21日來源:管理員
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血液制品是指從人體血漿中分離提取出的各種人血漿蛋白制品,主要包括人血白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子和其他蛋白成分。

血液制品分離需采用低溫乙醇沉淀分離法,各種蛋白在不同的條件下分步從溶液中析出。各組分精制則需采用層析方法,主要包括親和層析和離子交換層析。


『Capture SMB應用于親和層析』

傳統親和層析工藝,由于流穿效應,有40-60%的填料是無法被利用的,從而使得載量和處理量大為受限。Capture SMB用于優化捕獲環節,作為最簡單和最強大的2柱位設計,可使純化效率顯著提高,并且使填料用量大為縮減。

Capture SMB是在第一根層析柱出現樣品流穿時,繼續上樣至第二根層析柱,待第一根層析柱完全滿載后,方結束其上樣,進行洗脫、清洗等操作,而此時第二根層析柱仍繼續上樣。通過切換柱位操作,保證2根層析柱的洗脫、再生、上樣等操作交替銜接進行,保證連續上樣,從而實現工藝與系統硬件設計的完美結合,使填料利用率最大化,純化效率顯著提高。


從預處理血漿中捕獲AT-III通常采用肝素親和層析法。將單柱Batch工藝與Capture SMB進行對比實驗,使用親和填料TOYOPEARL? AF-Heparin?HC-650M,用血漿上清液(AT-III0.08-0.24 g/L)進行上樣,采用TSKgel Heparin-5PW分析柱進行濃度測定,最終研究表明,采用Capture SMB,可使填料載量提高45%,產率提高38%,同時使緩沖液消耗量降低29%。

『MCSGP應用于離子交換層析』

MCSGPMulti-column Counter-current Solvent Gradient Purification)是采用雙柱進行連續純化,可以解決單柱層析時純度和收率無法同時保障的問題。

采用MCSGP,可將含有不純組分的產品回收再純化, 進行循環式的層析操作,從而最大限度地提純產品,使得純度和收率二者兼得。




從血漿中純化AAT需采用DEAE離子交換層析,有研究表明,采用單柱Batch工藝純化AAT,產品純度76.7%時,收率為33.4%;產品純度65.0%時,收率為86.5%,純度和收率此消彼長。采用MCSGP工藝后,可在產品純度76.1%時,仍保證收率為86.7%。

從而最大限度地提純產品,使得純度和收率二者兼得。

『整體解決方案』

連續流層析可應用于血液制品純化的多個階段,有效提高純化效率,改善收率和純度,詳見下圖:

北京慧德易專注于層析領域十余年,可提供從層析設備、層析填料,到純化工藝、分析方法的整體解決方案。

『TOSOH填料選擇指南』


『慧德易實驗室&培訓中心』

北京慧德易已于2017年在北京昌平生命科學園蛋白質藥物國家工程研究中心成立慧德易實驗室&培訓中心,現已成功舉辦多期連續流技術培訓班及層析技術應用培訓班。


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